RG-1 Directives Réglementaires :
Chapitre 6 - Échantillons et exigences des analyses de laboratoire
6.3 Lignes directrices pour l'évaluation des méthodes pour déterminer l'activité des ingrédients enzymatiques utilisés dans les aliments du bétail

Une partie du procédé visant à l'enregistrement des aliments du bétail contenant des enzymes par l'ACIA est la soumission par l'applicant d'une méthode appropriée pour l'analyse du ou des enzyme(s) dans l'excipient/support. L'applicant doit également fournir les données nécessaires pour supporter la fiabilité de la méthode. Le protocole ici présenté vise à assurer que la méthode, les données et le matériel d'analyse soumis par l'applicant soient adéquats pour permettre une évaluation, validation et approbation rapide de la méthodologie.

1. Structure de la méthode

Le but de la description de la méthode est de permettre à l'évaluateur et à l'analyste de comprendre et de reproduire la méthode exactement tel que le désirait l'auteur. Il est donc nécessaire que la méthode contienne toutes les informations nécessaires présentées étape par étape dans un mode opératoire standard.

La méthode soumise doit être claire, concise et en usage courant dans la compagnie qui fait application. Il doit avoir été prouvé que la méthode est spécifique, sélective, fiable et précise pour la détermination de l'ingrédient actif (dans les formulations commerciales). La méthode doit contenir des instructions détaillées pour la préparation de la courbe standard, les équations nécessaires pour calculer l'activité et la définition de l'unité d'activité. Les points de contrôle critiques, les spécifications pour le contrôle de la qualité et pour la familiarisation doivent aussi être inclus dans la méthodologie. Une méthode manuelle et de base devra être présentée également dans le cas où la méthode en usage courant nécessite un équipement hautement spécialisé, coûteux ou automatisé.

Les documents justificatifs des critères de performance de la méthode doivent être inclus pour une évaluation appropriée (veuillez présenter les données sous forme de tableau.)

La description de la méthode devrait inclure :

• Applicabilité et principe de la méthodologie.
• Références.
• Description des réactifs et de l'équipement ainsi que les informations pertinentes à l'achat des réactifs et des critères de performance des réactifs et de l'équipement.
• Indications pour la préparation, l'entreposage et la stabilité des étalons analytiques et des réactifs.
• Préparation et stabilité de l'échantillon.
• Paramètres opérationnels et performance anticipée des instruments.
• Procédure pour l'analyse des échantillons, contrôles et étalon.
• Équations pour le calcul de la concentration ou de la puissance, instructions pour la construction de la courbe standard et exemple d'utilisation des équations.
• Définition de l'unité.
• Informations concernant les études collaboratives.
• Données de conformité du système (normes statistiques de la méthode).
• Substances interférentes.
• Information sur la sécurité et les précautions à prendre.

2. Pièces justificatives

Le répondant doit fournir les informations suivantes pour supporter la méthodologie proposée; normes de performance, points critiques, entreposage des échantillons, et cetera :

Courbe standard

L'applicant doit fournir de l'information concernant la fiabilité statistique de la courbe standard utilisée (directement ou indirectement) pour mesurer l'activité enzymatique.

Indiquer l'intervalle analytique (maximum et minimum)

• Indiquer le seuil de quantification,
• Indiquer le seuil de détection.

Fournir trois ensembles de données de calibration de courbe standard ainsi que le graphique (minimum cinq points). Pour chaque ensemble, fournir les données statistiques supportant la fiabilité de la courbe :

• indiquer la pente et le point d'intersection de la courbe,
• indiquer le coefficient de linéarité.

Fournir une comparaison statistique des trois courbes de standardisation.

Analyse enzymatique

Généralement, l'analyse de l'activité devrait être exécutée sur plusieurs dilutions pour la quantification de l'activité.

Présenter un minimum de trois ensembles de graphiques d'analyses d'enzyme (minimum 5 points) pour la détermination de la linéarité et de l'intervalle analytique. Spécifier la région linéaire.

Dans l'éventualité où un enzyme étalon certifié ne serait pas disponible, fournir les données statistiques justifiant l'usage d'un étalon maison (c'est-à-dire, fournir les données d'analyses précédentes avec comparaisons statistiques.)

Fournir les résultats pour l'analyse de trois lots (indiquer les numéros de lot) de produit enzymatique (chacun analysé en triple) pour la détermination de l'exactitude, la précision, spécificité, variance et pourcentage d'erreur.

Indiquer le pourcentage acceptable de recouvrement d'activité enzymatique.

Indiquer le coefficient de variation relatif de la répétitivité (interne).

Indiquer le coefficient de variance relatif de reproductibilité (entre laboratoires) si possible.

3. Description du projet expérimental d'évaluation de la méthode

Fournir une description du projet expérimental utilisé par la compagnie ou un autre laboratoire pour l'évaluation de la méthode. Inclure les données brutes et l'analyse statistique de l'évaluation de la méthode.

4. Évaluation en laboratoire par l'ACIA

Une fois que les conditions ci-haut mentionnées seront remplies, les laboratoires de l'ACIA procédera à l'évaluation de la méthode. Au moment où la méthode sera testée par les laboratoires de l'ACIA, le matériel suivant doit être fourni par la compagnie.

• Quantité appropriée d'enzyme pure standard ou de produit à quantifier pour construire la courbe standard.
• Quantité suffisante d'échantillon pour permettre cinq analyses en double à chaque niveau de garantie (composition, formulation). Si possible, fournir les mêmes échantillons que ceux utilisés pour générer les données.
• Quantité suffisante de substrat pour les analyses.
• Tout réactif inhabituel requis par la méthodologie.

5. Critères d'évaluation

Les critères suivants seront utilisés comme guide pour l'évaluation de la méthodologie :

• Facteur de régression de 0,995 ou mieux pour les courbes d'étalonnage
• Recouvrement de 95-110 %
• Coefficient de variation intra laboratoire de 5 %.

6. Rapport l'ACIA

Sur demande, l'ACIA préparera un rapport qui incluera les informations suivantes :

• Page couverture contenant : titre, répondant, identification du laboratoire de l'ACIA, nom et titre de l'évaluateur, date de publication.
• Énoncé sommaire indiquant l'acceptation ou le rejet de la méthode avec signatures et dates.
• Résultat de l'évaluation des données fournies par l'applicant.
• Résultat de l'évaluation de l'analyse du laboratoire de l'ACIA.
• Comparaisons des données de la soumission et de l'évaluation de l'ACIA.
• Données brutes, statistiques, tableaux.
• Discussion.
• Conclusion.

7. Modifications de la méthodologie

L'ACIA doit être informée de toute modification ou nouvelle méthodologie utilisée. La nouvelle méthodologie ou les changements doivent être vérifiés. Toutefois, le niveau de vérification dépendra de la nature et de l'impact des modifications.

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