7.9 Annexe 1 : Prélèvements d'échantillons et liste de laboratoires

Annexe 1A : Prélèvement de tissus cérébraux

La tête entière peut être envoyée à l'état frais ou congelé à un laboratoire approuvé.

Technique de prélèvement de l'obex

Instruments recommandés :

• couteau d'autopsie pour la désarticulation de la tête (au besoin);
• cuillère ou couteau pour l'ablation de l'obex; et
• pinces à dents de souris.

Autres instruments optionnels :

• scalpel; et
• ciseaux.

La cuillère ou le couteau destinés à l'ablation de l'obex peuvent être fabriqués avec les ustensiles du service à pamplemousse Jessica de marque Zwilling J.A. Henckels. On peut aussi modifier un couteau à beurre ou une cuillère concave (concavité de 6 mm) assez longue. Le tranchant du couteau doit être aiguisé. Les bords de la cuillère doivent être limés à 22-26 mm dans sa partie la plus large, puis affûtés comme une lame.

À l'aide d'un couteau d'autopsie, désarticuler la tête de la carcasse au niveau de l'articulation atlanto-occipitale. Placer la tête sur la table, sur sa face dorsale, le trou occipital (l'ouverture du canal rachidien) face à soi.

En tenant les pinces de la main gauche, saisir la dure-mère (la membrane épaisse recouvrant la moelle épinière) et avec les ciseaux, tenus dans la main droite, pratiquer une incision le long de la ligne médiane, de façon à former deux rabats. (Cette étape n'est pas obligatoire.) Enlever le sang coagulé autour de la moelle épinière.

Tout en tenant la dure-mère avec les pinces de la main gauche, séparer les nerfs crâniens de la moelle épinière. On peut exécuter cette opération avec des ciseaux ou encore avec la cuillère ou le couteau à obex en passant l'un ou l'autre de ces ustensiles autour de la moelle épinière, le côté plat de la cuillère ou du couteau contre la moelle (voir la position de la cuillère ou du couteau à obex par rapport à la moelle épinière sur l'image suivante). Il s'agit de l'étape du dégagement de la moelle épinière la plus importante. Celle-ci doit être parfaitement libre de toute attache (nerfs crâniens) et ce, dans toutes les directions. Si la moelle épinière n'est pas assez dégagée, il sera impossible d'aller suffisamment loin vers l'avant pour prélever l'obex ou il manquera l'un des côtés.

Prélèvement de tissus cérébraux - image 5

Insérer la cuillère ou le couteau à obex, la face vers le bas, dans le canal vertébral et pousser l'ustensile de manière à ce que le bout s'enfonce le plus loin possible dans le crâne. Ainsi, le bout de la cuillère ou du couteau devrait être au-dessus de la partie de la moelle située immédiatement à l'avant de l'obex et juste derrière les appendices cérébelleux.

Prélèvement de tissus cérébraux - image 7

Saisir la tête et, si l'on est droitier, la tenir dans la main gauche, la face dorsale vers le bas. En poussant vers le bas avec l'index, faire glisser la pointe de la cuillère ou du couteau à obex, en un mouvement de va-et-vient, par-dessus la moelle épinière pour que celle-ci se sépare du reste de l'encéphale, juste devant l'obex, et derrière les appendices cérébelleux. Faire pivoter le crâne avec l'autre main dans la direction opposée à la cuillère ou au couteau pour faciliter le sectionnement de la moelle épinière.

À l'aide de la cuillère ou du couteau à obex, retirer délicatement du canal la partie de l'encéphale qui a été sectionnée. L'obex est reconnaissable à sa dépression en forme de V. Il constitue la région la plus importante pour le diagnostic.

Communiquer avec le laboratoire auquel les échantillons seront envoyés et demander les instructions relatives à la préparation des échantillons (à l'état frais, congelé ou dans le formaldéhyde).

Congeler les échantillons et les expédier en lots à un laboratoire approuvé pour l'épreuve ELISA.

Il est également possible de placer le tronc cérébral et le cervelet dans un bocal de verre de 500 ml contenant une solution de formaldéhyde tamponnée à 10 %. Le rapport entre le volume du liquide fixateur et le volume des tissus doit être de 10 pour 1 (10:1). Laisser les échantillons dans le fixateur pendant 24 heures à cinq jours, selon leur taille (le formaldéhyde pénètre le tissu à raison d'au moins 5 mm par jour), et expédier les échantillons à un laboratoire approuvé. Ces tissus feront l'objet d'un examen histopathologique et d'une analyse immunohistochimique.

Les tissus prélevés pour la surveillance de la tremblante peuvent être emballés et expédiés en tant que échantillons animaux exemptés, conformément au Règlement sur le transport des marchandises dangereuses. La méthode d'emballage de base en quatre composantes peut être utilisée. Après fixation, l'échantillon doit être placé dans un premier emballage étanche (sac Whirl-Pak) sur lequel on appose une étiquette. Il doit ensuite être inséré dans un deuxième emballage étanche et robuste (sac Whirl-Pak) avec un matériau pouvant absorber tout le liquide en cas de bris. Le tout doit être placé dans un emballage offrant une protection (p. ex. boîte de carton résistant) contre les dommages matériels externes. La description du contenu sur le bordereau d'expédition du transporteur doit comprendre les inscriptions suivantes : « échantillons animaux exemptés ».

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Annexe 1B : Prélèvement de sang pour le génotypage

Ponction veineuse

Afin de faciliter le prélèvement rapide d'échantillons de sang de plusieurs moutons en un minimum de temps, il est recommandé de ne pas s'évertuer à mettre l'animal sur le dos. Il vaut mieux le laisser debout et l'immobiliser pour la ponction veineuse. Ne pas le raser.

Tout en bloquant l'orifice supérieur du thorax, trouver par palpation ou par approximation l'emplacement de la veine jugulaire et y introduire l'aiguille du Vacutainer.

Pour chaque animal, on utilisera une aiguille uniservice afin d'éviter la contamination croisée d'acide désoxyribonucléique (ADN).

Prélever de 7 à 10 ml de sang dans un tube (à bouchon lilas ou violet) contenant de l'acide éthylènediaminetétracétique (EDTA).

S'assurer que les paramètres d'identification de l'échantillon et de l'animal correspondent de manière irréfutable.

Les échantillons doivent être conservés à 4 °C jusqu'à leur expédition. Les envoyer au laboratoire le plus tôt possible.

Vérifier auprès de chaque laboratoire s'il a des préférences quant aux conditions et au jour de l'envoi des échantillons.

Échantillons de tissus pour le génotypage des animaux morts

On peut utiliser des tissus frais ou congelés provenant, par exemple, de l'encéphale, du foie, de la rate ou des reins. Vérifier auprès de chaque laboratoire s'il a une préférence quant au tissu. Étant donné qu'il faut envoyer au laboratoire la tête ou un échantillon d'encéphale pour le dépistage de la tremblante, il serait plus simple que le laboratoire envoie un échantillon d'encéphale pour le génotypage.

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Annexe 1C : Prélèvement de follicules lymphoïdes de la membrane nictitante

Comme les tissus lymphoïdes qu'on prélève peuvent être infectieux et que le site de prélèvement (l'œil) peut servir de voie de pénétration à l'agent de la tremblante, il est nécessaire de prendre des précautions pour empêcher la transmission de la tremblante lorsqu'on échantillonne des troupeaux susceptibles d'être une source de l'agent de la maladie.

Les instruments peuvent être manipulés de l'une des façons suivantes :

• On peut se servir d'instruments à usage unique qu'on jette après les avoir utilisés pour un seul animal.
• On peut utiliser des instruments à usages multiples désinfectés à l'aide d'un produit et suivant un protocole reconnus pour être prionicides. (Voir module 7.9 annexe 2.)
• On peut également, pour chaque mouton, déposer les pinces et ciseaux utilisés dans un sac portant les paramètres d'identification du mouton échantillonné et les garder jusqu'à ce que les résultats des épreuves soient connus. Si, pour un mouton particulier, les résultats se révèlent positifs, il est recommandé de jeter la trousse d'instruments correspondant à l'animal. Si, par contre, les résultats sont négatifs, les instruments correspondants peuvent être désinfectés suivant le protocole habituel et réutilisés normalement.

Technique

Il faut une personne pour immobiliser l'animal.

S'assurer, en vérifiant les paramètres d'identification de l'animal, que son génotype est 171 QQ.

Mettre quelques gouttes d'un anesthésique ophtalmique local (proparacaïne, lidocaïne ou xylocaïne) dans l'œil choisi.

Appliquer sur la surface bulbaire de la membrane nictitante une goutte de solution d'histamine à 1 %. Cette solution permet de repérer beaucoup plus facilement la région des follicules lymphoïdes en la rendant hyperémiée ainsi que légèrement saillante et irrégulière.

Remarque : La solution d'histamine peut être préparée par une pharmacie vétérinaire, par exemple :

• Veterinary Pharmacy, chemin Imperial, Guelph (Ontario) 519-824-7887; ou
• Strathcona Prescription Centre, 8225, 105^e Rue, Edmonton (Alberta) T6E 4H2, 780-432-0394 ou 1-888-433-2334.

Laisser les gouttes agir pendant 5 ou 6 minutes.

Saisir le bord de la membrane nictitante avec des pinces à tissu, le retourner et observer la surface ventrale (bulbaire) de la membrane nictitante.

À l'aide de ciseaux (des Metzenbaum, de préférence), les lames posées à plat sur la membrane nictitante, prélever les follicules lymphoïdes repérés. Déposer l'échantillon dans un tube à essai ou une petite fiole contenant du formaldéhyde. Envoyer l'échantillon à un laboratoire pouvant effectuer le dépistage de la tremblante sur des tissus lymphoïdes.

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Annexe 1D : Biopsie du tissu lymphoïde associé à la muqueuse recto-anale

Comme les tissus lymphoïdes qu'on prélève peuvent être infectieux et que le site du prélèvement peut, théoriquement, servir de voie de pénétration (tissu rectoanal) à l'agent de la tremblante, il est nécessaire de prendre des précautions pour empêcher la transmission de la tremblante lorsqu'on échantillonne des troupeaux susceptibles d'être une source de l'agent de la maladie. Les instruments peuvent être manipulés de l'une des façons suivantes :

• On peut se servir d'instruments à usage unique qu'on jette après les avoir utilisés pour un seul animal.
• On peut utiliser des instruments à usages multiples désinfectés à l'aide d'un produit et suivant un protocole reconnus pour être prionicides (module 7.9 annexe 2).
• On peut également, pour chaque prélèvement, déposer les pinces et ciseaux utilisés dans un sac portant les paramètres d'identification de l'animal échantillonné et les garder jusqu'à ce que les résultats des épreuves soient connus. Si, pour un animal particulier, les résultats se révèlent positifs, il est recommandé de jeter la trousse d'instruments correspondant à cet animal. Si, par contre, les résultats sont négatifs, les instruments correspondants peuvent être désinfectés suivant le protocole habituel et réutilisés normalement.

Technique

Une personne doit se charger d'immobiliser l'animal en le maintenant appuyé contre un mur ou dans un coin.

Vérifier l'identification de l'animal. S'il s'agit d'un mouton, vérifier également que son génotype est QQ en 171.

Remarque : Cette méthode de dépistage est valable pour les moutons de tous les génotypes.

On peut appliquer, avec un doigt ganté, une crème anesthésique/analgésique (lidocaïne et prilocaïne) sur la muqueuse de la partie distale du rectum. On peut utiliser, par exemple, de l'EMLA (mélange eutectique d'anesthésiques locaux); il s'agit d'une émulsion huile/eau d'un mélange eutectique à parts égales de crèmes à base de lidocaïne et de prilocaïne produit par AstraZeneca Canada Inc. La lidocaïne et la prilocaïne, deux substances solides à la température ambiante, constituent un mélange eutectique sous forme d'huile dont le point de fusion est 16 °C.

Si le prélèvement est fait à l'aide d'un spéculum rectal, avant de l'introduire dans le rectum, appliquer une quantité généreuse de crème analgésique, celle-ci ayant aussi des propriétés lubrifiantes.

Laisser la crème analgésique/anesthésique agir pendant environ cinq minutes.

Palper/visualiser la jonction recto-anale. Les échantillons doivent être prélevés à environ 1-2 cm avant cette jonction (partie proximale). Les meilleurs sites de prélèvement comprennent les surfaces dorso-latérale (à 10 et à 2 heures) et ventrolatérale (à 4 et à 8 heures) de la muqueuse. Prélever des tissus aux emplacements situés à 10 et à 2 heures et, au besoin, à 4 et à 8 heures. Éviter la voûte et le plancher (6 et 12 heures). Au moyen de pinces, soulever la muqueuse/crypte de manière à former une « tente » de tissu. Exciser cette tente à l'aide de ciseaux et étendre l'échantillon sur une éponge dans une petite cassette et placer cette cassette dans une petite fiole contenant du formaldéhyde.

Remarque : Pour plus amples renseignements, visiter le site Web Veterinary Instrumentation (en anglais seulement).

Envoyer l'échantillon à un laboratoire pouvant effectuer le dépistage de la tremblante sur des tissus lymphoïdes.

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Annexe 1E : Liste des laboratoires

Laboratoires canadiens offrant le service de génotypage à l'égard de la tremblante, non approuvés par l'ACIA à l'heure actuelle

GenServe Laboratories (disponible en anglais seulement)
Saskatchewan Research Council
125-15, boulevard Innovation
Saskatoon (Saskatchewan) S7N 2X8
Téléphone : 306-933-7700; sans frais : 1-866-420-2293
Télécopieur : 306-933-5505

TransBIOTech
201, route Monseigneur-Bourget
Lévis (Québec) G6V 9V6
Téléphone : 418-833-8876
Télécopieur : 418-833-8867

Idexx Laboratories
1345, rue Denison
Markham (Ontario) L3R 5V2
Téléphone (sans frais) : 1-800-667-3411
Télécopieur : 905-475-7309

Laboratoires approuvés par l'ACIA pour le génotypage à l'égard de la tremblante

Animal Health Laboratory (disponible en anglais seulement)
Laboratory Services (Université de Guelph)
Collège de médecine vétérinaire de l'Ontario
Édifice 49, C. P. 3612
Guelph (Ontario) N1H 6R8
Téléphone : 519-824-4120 (poste 54544)
Télécopieur : 519-821-8072

Les laboratoires approuvés par le département de l'Agriculture des États-Unis (USDA) pour le génotypage à l'égard de la tremblante sont également approuvés par la Division de la santé des animaux terrestres de l'ACIA en ce qui concerne l'exportation et l'analyse de certification des troupeaux. La liste actuelle des laboratoires approuvés par l'USDA pour le génotypage à l'égard de la tremblante se trouve sur le site Web du Animal and Plant Health Inspection Service de l'USDA sous la rubrique Approved Laboratories for Genotype Testing (disponible en anglais seulement).

Orchid Cellmark
(Analyses effectuées au Royaume-Uni)
635, rue Columbia
New Westminster (Colombie-Britannique) V3M 1A7
Téléphone : 604-523-2945; sans frais : 1-800-563-4363
Télécopieur : 604-523-2974

LABOGENA
Domaine de Vilvert
78352 Jouy-en-Josas
Cedex, France
Téléphone : 01 34 65 21 21
Télécopieur : 01 34 65 20 51

Laboratoires approuvés par l'ACIA pour le dépistage de la tremblante à l'aide du test Bio-Rad ELISA

Alberta Agriculture and Rural Development
Agri-Food Laboratories Branch (disponible en anglais seulement)
TSE Laboratory
6909 - 116^e rue
Edmonton (Alberta) T6H 4P2
Téléphone : 780-422-4830
Télécopieur : 780-415-4527

Animal Health Laboratory (disponible en anglais seulement)
Laboratory Services (Université de Guelph)
Collège de médecine vétérinaire de l'Ontario
Édifice 49, C. P. 3612
Guelph (Ontario) N1H 6R8
Téléphone : 519-824-4120, poste 54544
Télécopieur : 519-821-8072

Prairie Diagnostic Services Inc. (disponible en anglais seulement)
59, rue Campus
Saskatoon (Saskatchewan) S7N 5B4
Téléphone : 306-966-7316

Manitoba Agriculture, Food and Rural Initiatives
Veterinary Services Branch
Veterinary Diagnostic Services
545, croissant de l'Université
Winnipeg (Manitoba) R3T 5S6
Téléphone : 204-945-8220

Ministère de l'Agriculture, des Pêcheries et de l'Alimentation (MAPAQ)
Laboratoire d'épidémiosurveillance animale du Québec
3220, rue Sicotte
Saint-Hyacinthe (Québec) J2S 7X9
Téléphone : 450-778-6542
Télécopieur : 450-778-6535

Remarque : Des échantillons peuvent aussi être envoyés au Laboratoire d'Ottawa (Fallowfield), de Lethbridge ou de Saint-Hyacinthe par l'entremise d'un bureau de district de l'ACIA dans le cadre du Programme national de surveillance de la tremblante.

Laboratoires approuvés par l'ACIA pour le dépistage de la tremblante dans la membrane nictitante et la biopsie des tissus lymphoïdes associés à la muqueuse recto-anale grâce à l'immunohistochimie

Le Laboratoire d'Ottawa (Fallowfield) de l'ACIA effectue le test d'immunohistochimie (IHC). Veuillez communiquer avec un bureau de district local pour soumettre des échantillons à ce test et payer les frais connexes.

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